Efeito do estradiol e da progesterona no desenvolvimento e na qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro / Effect of estradiol and progesterone on development and quality of bovine embryos produced in vitro

Avaliaram-se o desenvolvimento e a qualidade de embriões bovinos, cocultivados com células epiteliais do oviduto bovino (CEOBs) expostas ou não ao estradiol e à progesterona. Os ovócitos foram maturados in vitro por 24h e, então, fertilizados utilizando-se sêmen congelado, em estufa de CO2 a 5 por cento e 38,5ºC. As CEOBs foram cultivadas em TCM-199 com ou sem estradiol (E2) (24 horas), nas mesmas condições da maturação e fertilização in vitro (MIV e FIV), e, em seguida, adicionadas aos diferentes grupos em CR2 com ou sem progesterona (P4) (G1=P4+E2); (G2=E2); (G3=P4) e (G4=controle). Após 18h da FIV, as células foram cultivadas nos diferentes sistemas. Nenhuma diferença (P>0,05) foi observada nas taxas de clivagem entre G1, G2 e G4 (53,5 por cento; 56,3 por cento; 51,7 por cento) e nos padrões de blastocistos (BLs) (29,3 por cento; 31,2 por cento, 28,7 por cento). Índices menores (P<0,05) foram obtidos no G3 para ambas as variáveis (34,5 por cento; 16,4 por cento). G1 e G2 apresentaram taxas de eclosão maiores (P<0,05) que os outros grupos (23,3 por cento; 23,2 por cento), sendo G4 (19,3 por cento) diferente de G3 (16,1 por cento). Em G1, G2 e G3, o número de células nos BLs aumentou 125,9; 128,4 e 123,6, respectivamente (P<0,05), em relação ao G4 (112,5). Conclui-se que o tratamento das CEOBs com o E2, nas primeiras 24 horas de cultivo, pode ser usado isoladamente ou em combinação com a progesterona, a fim de melhorar a qualidade de embriões bovinos produzidos in vitro.

The development and quality of bovine embryos co-cultivated with bovine oviduct epithelial cells (BOEC) supplemented or not with estradiol and progesterone were evaluated. Oocytes were matured and fertilized in vitro (MIV/FIV) (5 percentCO2/38.5ºC). The BOEC were cultivated in TCM-199 with or without estradiol (E2) (24h), in the same conditions of MIV/FIV. Presumptive zygotes were transferred to BOEC in suspension after in vitro maturation and fertilization of bovine oocytes with thawed percoll-selected sperm. The zygotes were cultivated in CR2 medium containing or not progesterone (P4) (G1=P4+E2), (G2=E2), (G3=P4), and (G4=control). No significant differences (P>0.05) were found in the cleavage rates among G1, G2, and G4 (53.5 percent, 56.3 percent, and 51.7 percent) as well as in relation to the blastocystis (BL) rates (29.3 percent, 31.2 percent, and 28.7 percent). However, significant differences (P<0.05) were observed in the G3 for both variables (34.5 percent and 16.4 percent). G1 and G2 showed hatching rates higher (P<0.05) than the other groups (23.3 percent; 23.2 percent), being G4 (19.3 percent) different from G3 (16.1 percent) (P<0.01). In the groups G1, G2, and G3, the total cell number of the BL increased (125.9, 128.4, and 123.6) (P<0.05) compared to G4 (112.5). These results demonstrate that the treatment of the BOEC with estradiol in first the 24 hours of culture can be used separately or in combination with the progesterone to improve the quality of bovine embryos produced in vitro.

Influence of climatic conditions on in vitro production of bovine embryos / Influência do clima na produção in vitro de embriões bovinos

Temperature and rainfall were analyzed daily during six years to evaluate their influence on in vitro production of bovine embryos. Weekly replications (n=480) were performed on 14,778 ovaries collected at slaughterhouses. Cumulus oocyte complexes (n=19,180) were fertilized with a pool of Bos taurus taurus semen in one incubator with 5 percent CO2. Presumable zygotes were cultured in gasified plastic bags with 5 percent CO2, 5 percent O2, and 90 percent N2. In the first year, cleavage and embryo yield were 60.3 percent and 15.6 percent, respectively, being lower (P<0.05) than in the following years. Average cleavage rates were always lower in winter (P<0.0001), thus producing less embryos. Winter climatic conditions had a negative influence on in vitro production, when cleavage and embryo yield declined, possibly because of reduced availability and growth of native pasture.

A temperatura e a precipitação pluviométrica foram analisadas diariamente, durante seis anos, para avaliar sua influência sobre a produção in vitro de embriões bovinos. As repetições semanais (n=480) foram realizadas com 14.778 ovários coletados em matadouros. Os oócitos (n=19.180) foram maturados em estufa com atmosfera com controle de temperatura e umidade saturada com 5 por cento de CO2 e, após 20h, foram fecundados com sêmen de Bos taurus taurus e mantidos sob as mesmas condições de atmosfera da maturação. Os zigotos foram cultivados em placas de quatro poços em bolsas gaseificadas com 5 por cento de CO2, 5 por cento de O2 e 90 por cento de N2, à temperatura de 39ºC e umidade saturada. No primeiro ano, a taxa clivagem (60,3 por cento) e a produção de embriões (15,6 por cento) foram inferiores (P<0,05) aos demais anos. As taxas de clivagem foram sempre menores no inverno (P<0,0001). As condições climáticas no inverno tiveram influência negativa sobre a produção in vitro de embriões bovinos e houve diminuição nos índices de clivagem e produção de blastocistos, possivelmente devido à reduzida disponibilidade e crescimento da pastagem nativa.

Desarrollo embrionario y estrategias antiluteoliticas hormonales en programas de transplante de embriones bovinos / Embryonic development and hormonal antiluteolytic strategies for embryo transfer programs in cattle

Durante el desarrollo embrionario se establecen múltiples interacciones entre hormonas,factores de crecimiento (FC) y diferente tipo de moléculas, con lo cual se genera una seriede señales que desencadenan el reconocimiento materno de preñez (RMP) entre los días 15y 17, momento en el cual se genera un “periodo crítico”, cuando el endometrio libera lahormona prostaglandina F2α (PGF2α)para causar regresión del cuerpo lúteo (CL), en el cualse sintetiza progesterona (P4), hormona encargada de favorecer un adecuado ambienteuterino para el desarrollo embrionario y el mantenimiento de la preñez. El embrión en desarrollogenera señales antiluteolíticas que bloquean la producción de la PGF2α, por lo que se podríasugerir que el mantenimiento de la preñez es dependiente de la efectividad de este bloqueo,entre otros factores; el cual es generado por la acción del Interferón tau (IFN-τ), producidoen las células mononucleares del trofoblasto embrionario. Este bloqueo garantiza la integridaddel CL y de esta forma la producción normal de P4. Por lo anterior se podría pensar que lamanipulación estratégica apoyada hormonalmente, mejora las condiciones para el efectivobloqueo de los agentes luteolíticos que tienen su mayor actividad durante el llamado “periodocrítico”, con lo cual se mejora la tasa de sobrevivencia en programas de transplante embrionarioya que se crearía un ambiente uterino adecuado para el establecimiento y normal desarrollodel embrión. Por esto mismo, últimamente se han planteado mecanismos de apoyo hormonalque causan un bloqueo apropiado en cuanto a la producción de PGF2α uterina durante losdías15 y 17 del ciclo estral.

Criopreservação e desenvolvimento in vitro de embriões bovinos / Cryopreservation and in vitro survival of bovine embryos

O objetivo deste trabalho foi estudar a remoção do crioprotetor, em duas ou três etapas, em embriões bovinos produzidos in vitro após a congelação em vapor de Nirtogênio. Blastocistos expandidos (1329) foram mantidos em co-cultivo (controle) ou criopreservados em 3 protocolos de congelação em vapor de nitrogênio. Os embriões foram equilibrados na solução de 10% de EG por 10 minutos e em 17%, 22% ou 28% de EG por 30 segundos. Após o envase, as palhetas foram mantidas em vapor de nitrogênio por 2 minutos e armazenadas em nitrogênio líquido. Após a descongelação, os crioprotetores foram diluídos em duas etapas, usando 0,3M de sacarose e solução isotônica ou em três etapas usando 0,3M de sacarose + 10% de EG; 0,3M de sacarose e solução isotônica. Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa, avaliando as taxas de re-expansão após 24 horas e de eclosão após 24, 48, 72 e 96 horas. Para os grupos congelados no vapor e diluição do crioprotetor em duas etapas, as taxas de eclosão foram de 1,94; 11,88 e 6,06% para EG17, EG 22 e EG 28 respectivamente. Já para os grupos com diluição do crioprotetor em três etapas, as taxas de eclosão foram de 4,67; 9,90 e 10,78% para EG17, EG22 e EG28 respectivamente.

The aim of this study was to evaluate the dilution of cryoprotectant in 2 or steps of bovine in vitro-produced embryos after quick-freezing. A total of 1329 expanded blastocyst were kept in co-culture as control group or cryopreserved by 3 quick-freezing protocols. The embryos were exposed to 10% EG for 10 minutes then to 17%, 22% or 28% for 30 seconds. After loading, the straws were held in nitrogen vapor for 2 minutes and then plunged and stored in liquid nitrogen. After warming, cryoprotectants were diluted in two steps using 0.3 M sucrose and isotonic solution, or three steps using 0.3 M sucrose + 10% EG then 0.3 M sucrose and isotonic solution. Embryos were co-cultured on a granulosa cell monolayer and evaluated after 24 hours for re-expansion and at 24, 48, 72 and 96 hours of co-culture for hatching rates. The in vitro survival rates of embryos cryopreserved by the quick-freezing method and two-step cryoprotectant dilution were 1.94; 11.88 and 6.06%, for EG17, EG22 and EG28 groups, respectively. At the three step dilution, the in vitro survival rates were 4.67; 9.90 and 10.78% for EG17, EG22 and EG28 groups, respectively.

Expression of TGFbeta Family in the Developing Internal Ear of Rat Embryos

In order to investigate the expression patterns of the transforming growth factor (TGF)beta isoforms in the internal ear, an immunohistochemical study of rat embryos was performed. Rat embryos were taken on the 13th, 15th, 17th, and 19th day after conception and their internal ears were immunohistochemically stained against TGF beta1, beta2, and beta3. As a result, the 13-day-old embryo showed a very weak positivity to TGF beta1. After the 15th day of pregnancy, no reactivity to TGF beta1 was defected. Immunoreactivity to TGF beta2 was observed from the 15th day of pregnancy throughout the rest of the period. The ampulla of the semicircular canal and the cochlear duct showed a notably strong immunohistochemical reaction. A strong reaction to TGF beta3 was observed on the 15th day of pregnancy. However, no positive reactions were observed thereafter. A strong immunoreactivity was observed especially on the apical cytoplasms, the surfaces of the epithelial cells, and basement membranes of the cochlear duct, as well as the semicircular canals of the developing internal ear of rat embryo.

La bioetica y la dignidad humana Que hay de nuevo sobre la Ética y el Pre-embrión Humano? / Bioethics and human dignity

El reconocimiento universal a la dignidad humana no ha sido una empresa fácil de conseguir ni tampoco es comprensible para muchos contemporáneos. Las razones son muchas, pero sobresalen estas:Necesidad de un desarrollo del juicio moral que haga comprensible los valores morales universales.Desarrollo incipiente de sociedades bien organizadas.Climas políticos propios.También se necesita dilucidar “por qué las personas son dignas”, entendiendo por dignidad una cualidad transitiva que implica que alguien es merecedor de recibir un trato especial a cambio o en proporción a un mérito o condición también especial. Lo anterior nos pone a pensar sobre la siguiente afirmación: “El pre-embrión humano no es persona, pero sí el embrión. El pre-embrión humano es persona humana potencial”.Entonces...¿será el pre-embrión un ser carente de dignidad humana?.

Effect of DEHP[Di-2ethyl hexyl-phthalate] on resumption of meiosis and in -virto maturation of mouse oocytes and development of resulting embryos

DEHP [di[2-ethylhexyl] phthalate]] is widely used in plastic industry and some reproductive toxicity has been shown with it. So, this study was designed to evaluate DEHP effects on resumption of meiosis and in vitro maturation of mouse oocytes as well as development of embryos resulted from them. Mice of 4-6 weeks old were administered daily doses of 50, 100, 200 microl of 2.56 micro M DEHP solution for 12 days. Immature mouse oocytes were recovered from all experimental groups and matured in MEM-alpha medium containing 5% FCS with and without 7.5 IU hCG and 100 mIU rFSH. IVF was performed T6 medium. Resumption of meiosis and in vitro maturation were significantly lower in all experimental groups in culture media without hormones compared to controls. Fertilization and embryo development were also significantly decreased in both culture media [with and without hormones]. This study showed the adverse effects of DEHP on in vitro maturation and embryo development in a dose dependent manner

La realidad del Embrion Humano en los primeros quince dias de vida / The reality of the Human Embryo in the first fifteen days of life

El embrión temprano no es un simple tejido homogéneo e indiferenciado. El cigoto (o fase unicelular del individuo) se constituye, a partir del material heredado de los progenitores, como una célula con organización polarizada y con una propiedad peculiar que la distingue de cualquier otra célula: contiene el plano de las primeras divisiones celulares y se organiza en una unidad vital, tanto en sus estructuras espaciales como en sus funciones. Es un organismo en su fase inicial más sencilla y no una mera célula. El concepto de preembrión (aplicado al embrión preimplantatorio), como una fase del desarrollo en que no ha alcanzado el carácter de individuo de la especie, por la posibilidad de dar origen por división a gemelos monocigóticos, carece de fundamento biológico. Un embrión no se parte en dos mitades porque es asimétrico y las diversas células que lo componen son diferentes entre sí, desde el estado de dos células. El estatus del embrión preimplantatorio (generado naturalmente o creado in vitro) es el mismo: individuo de la especie humana. In vitro disminuye drásticamente la capacidad de un correcto desarrollo, en simbiosis armonizada con la madre; pero no significa menor humanidad, sino que siendo un ser humano, se le ha generado y situado en unas circunstancias en las que la capacidad de seguir viviendo está limitada

Reconstrucción tridimensional de la mano de un embrión humano de 43 días: evaluación experimental, teoría y metodología / Three-dimensional reconstruction of the hand of a human embryo of 43 days: experimental evaluation, theory and methodology

El avance tecnológico en la práctica obstétrica y particularmente en el campo de la ultrasonografía ha dejado en evidencia el impacto que la visualización del dinámico desarrollo de la gestación ha tenido, en el conocimiento de los fenomenos que ocurren durante la vida intrauterina. En esta perspectiva y dada la demanda creciente de información, particularmente del desarrollo embrionario, la reconstrucción tridimensional virtual desde secciones bidimensionales se presenta como una nueva opci¢n y una herramienta util al conocimiento del desarrollo de estructuras complejas durante la morfogénesis. En este trabajo se presentan material, métodos, y resultados experimentales que se obtuvieron al desarrollar un sistema computacional interactivo para la reconstrucción tridimensional de la mano de un embrión humano de 43 días a partir de cortes seriados. Se describen los componentes principales del ambiente virtual, las principales técnicas de generación de actores tridimensionales y en especial la técnica Marching Cubes empleada para la generación de superficie de la piel y de la estructura esquelética de la mano. Se discute el problema de registración de imagenes, describiendo la técnica de registraci¢n de puntos rígidos empleada y se presenta un método alternativo de registración secundaria para solucionar problemas derivados por la distancia existente entre los puntos fiduciales y la muestra en estudio. Se presentan además, los resultados obtenidos de la aplicación de la técnica Data Cutting e interpolación trilineal para la obtención de cortes virtuales sagitales, axiales y coronales. Sobre la base de los resultados obtenidos, se proponen futuras aplicaciones incorporando técnicas de textura y de visualización en función del tiempo. Se enfatiza la importancia de la interdisciplina en el logro de estos objetivos

Diferenciación sexual embrio-fetal: de las móleculas a la anatomía / Fetal sex differentiation: from molecules to anatomy

El sexo del embrión queda determinado en el momento de la fecundación según que el espermatozoide contenga un cromosoma X o un cromosoma Y. Sin embargo, trascurren varias semanas durante la embriogénesis humana sin que existan diferencias evidentes-aún al microscopio- entre un feto de sexo femenino y uno de sexo masculino. A partir de la expresión del gen SRY en los fetos XY, las futuras gónadas inician una serie de eventos caracterizados por expresión de proteínas, que determinan cambios citológicos, histológicos y funcionales característicos de los testículos. Este evento relativamente temprano en el desarrollo del sexo se denomina determinación sexual, dada su importancia determinante en el resto de los eventos que se suceden luego. Los testículos secretan dos hormonas, hormona ani-Mülleriana y testorona, cuya acción provoca la masculinización de los esbozos de los órganos genitales internos y externos, que no mostraban hasta entonces diferencias entre los sexos. El proceso de diferenciación de los genitales se denominan diferenciación sexual fetal. Poco se conoce hasta hoy sobre los mecanismo que inducen a las gónadas a tomar caminos ováricos en el feto XX. Es sabido desde hace tiempo, en cambio, que la falta de las hormonas testiculares resulta en la feminización de los genitales internos y externos, independientemente de la existencia o ausencia de ovarios. El conocimiento de los mecanismos moleculares, celulares y endocrinos involucrados en el desarrollo sexual fetal permiten comprender mejor la patología resultante de sus respectivas alteraciones que generan cuadros clínicos conocidos como ambigüedades sexuales

Growth factors and embryo development

In this review are cited and discussed the possible roles of growth factors on preimplantation embryo development of different species. In first term, is considered the mRNA detection in early stages of development. The distribution pattern was not uniform for the different peptides evaluated. For some of them, the mRNAs are detected at the oocyte stage and the level declines to the blastocyst stage, which suggests a maternal origin for them. For others, the level increased from 2-4 cells to blastocyst stage. On the other hand, transcripts of growth factor receptors have been detected in preimplantation embryos. This suggests that growth factors of maternal or embryo origin interact with specific receptors on preimplantation embryo surface and regulate the early development. On the other hand, culture media supplemented with different growth factors have been used to study the possible effects on in vitro development. Some investigators have found no effect. Others, however, have demonstrated changes in protein synthesis, cell number, differentiation and hatching processes. Embryo development modulation by growth factors probably involves a balance between stimulatory and inhibitory effects, although works are needed to determine the precise roles played by these polypeptides during early stages of mammalian development.

Embriofetopatías por abuso de drogas que producen dependencia / Embryofetuspathies by drugs abuse that produced dependencies

A través de los siglos, las sociedades han sentido temor por los efectos adversos que puede tener el entorno en el desarrollo del feto. Se conocen como teratógenos los agentes farmacológicos, químicos, físicos o infecciosos que actúan sobre el embrión o el feto ocasionando daño estructural o funcional. En este sentido, hemos hecho una revisión sobre los daños ocasionados al embrión y al feto por las drogas ilícitas a fin de ayudar a los pediatras en el reconocimiento de las anomalías producidas por ellas, entender el curso de dichos trastornos y así poder orientar al niño, a su familia y a la comunidad. Igualmente alertar a los adolescentes sobre el riesgo a que está sometida su descendencia en caso de consumirlas durante el embarazo . El efecto teratogénico de algunas de ellas es bien conocido como el de el alcohol y la cocaina, pero en otras está en estudio, de allí nuestro interés en investigar el posible efecto teratogénico u otros efectos de la marihuana, ácido lisérico (LSD), nicotina y cafeína, anfetaminas y solventes inorgánicos. Es de hacer notar que no se conoce ninguna estadística en nuestro país sobre esta problemática

Eficiência da recuperação de embriões e os efeitos de consecutivas colheitas sobre o aparelho reprodutor de doadoras da espécie caprina / Efficiency and effect of consecutive embryo recoveries on the reproductive system of goat donnors

O objetivo deste experimento foi comparar a eficiência e o efeito de consecutivas colheitas de embriões, por três diferentes métodos (transcervical-T1, laparoscopia-T2 e laparotomia-T3), sobre a atividade reprodutiva de doadoras da espécie caprina. Utilizaram-se 10 cabras em cada método (T1, T2 e T3), sendo as colheitas de embriões repetidas três vezes consecutivas, nas mesmas fêmeas, com intervalo de 56 dias. As fêmeas foram sincronizadas com esponjas vaginais impregnadas com 60 mg de acetato de medroxiprogesterona durante 10 dias e 100 æg de cloprostenol aplicados pela via IM no oitavo dia da sincronização. No 8° dia, iniciou-se a superovulação com 250 UI de FSH de origem suína, divididas em oito doses decrescentes, aplicadas em intervalo de 12 horas. As fêmeas foram acasaladas e as colheitas de embriões realizadas no 5° ou 6° dia após a última cobertura. Após 56 dias da terceira colheita de embriões, foram realizados o abate e a necrópsia das doadoras. O tempo necessário para a colheita de embriões em cada método foi de 21 minutos e 32 segundos; 37 minutos e 14 segundos e 56 minutos e 22 segundos, respectivamente, para T1, T2 e T3 (p<0,01). A maior taxa de recuperação da solução de lavagem foi no T3 (83,7 por cento), seguido por T2 (72,2 por cento) e T1 (64,3 por cento) (p<0,05). As taxas médias de recuperação dos embriões foram 57,1; 81,1 e 27,3 por cento para T1, T2 e T3, respectivamente, com variação entre 0-100 por cento. A taxa de recuperação de embriões sofreu influência de vários fatores, como a presença de corpos lúteos regredidos, a taxa de ovulação e a presença de aderências no sistema genital, mas, isoladamente, a taxa de recuperação de embriões foi satisfatória nos três métodos. O T1 causou eversão do endométrio e aderência entre o corno uterino e o epíploo em uma única fêmea, o T2 causou eversão do endométrio em 30 por cento, 40 por cento e 60 por cento e aderências do sistema genital em 10 por cento, 10 por cento e 70 por cento das fêmeas à 1ª, 2ª e 3ª colheitas, respectivamente. O T3 causou aderências no sistema genital em 80 por cento das doadoras após a primeira e 100 por cento após a segunda colheita. O T1 e o T2 permitem o uso de doadoras em repetidas colheitas de embriões, o que não ocorre com o T3, que causa aderências no sistema genital e órgãos circunvizinhos em 100 por cento dos casos.

Genesis y uso del termino pre-embrion en la literatura cientifica actual / Present use of the term pre-embryo

Durante estos últimos años el debate sobre el carácter humana del embrión ha continuado. Uno de los hechos que pueden percibirse en este debate, contrariamente a lo que sucedió en los primeros anos, es el olvido sistemático de la palabra ®pre-embrión¼ para referirse al embrión preimplantatorio. En este trabajo, tras analizar el nacimiento de esta palabra y los intentos de dotarla de una conceptualización adecuada, describimos y constatamos mediante un sencillo estudio bibliométrico el poco éxito que ha tenido esta palabra así como el estancamiento de esta desde su aparición. En conclusión, no sólo se puede certificar la carencia conceptual de éste término, es decir, su no correspondencia con realidad alguna, sino también certificar a nivel fenomenológico el escaso uso de ella, con lo que también se avala el carácter artificial del término.